期刊简介
中国科学技术协会主管，中华医学会主办。本刊原《眼科研究》，是中国科技论文统计源期刊和中文核心期刊。本刊关注国内外实验眼科学发展动态，传播眼科基础研究重大进展，报道眼科实验研究成果及其临床应用，读者对象为高等院校、科研单位和临床眼科工作者。本刊国内发行于包括港、澳、台在内的我国各省份和地区，国外发行在东南亚、北美、西欧等地区的部分国家。本刊期待刊出高质量的研究成果，以飨读者。
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首页>中华实验眼科杂志
- 杂志名称：中华实验眼科杂志
- 主管单位：中国科学技术协会
- 主办单位：中华医学会
- 国际刊号：2095-0160
- 国内刊号：11-5989/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：中国中文核心期刊期刊收录：北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 万方收录(中), 知网收录(中), 医学文摘, 哥白尼索引(波兰), 维普收录(中), 国家图书馆馆藏, JST 日本科学技术振兴机构数据库(日), CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), 上海图书馆馆藏, CA 化学文摘(美)
外源性脯氨酸羟化酶对人RPE细胞中缺氧诱导因子通路的负向调节作用
马昱；唐少华；姜燕荣；石璇
关键词：细胞缺氧, 血管内皮生长因子, 基因表达调控, 缺氧诱导因子-1, 脯氨酸羟化酶/代谢, 人, 转录因子, 视网膜色素上皮细胞
摘要：背景 目前抗VEGF药物的应用已广泛用于眼部新生血管性疾病发病的治疗,但有部分患者的疗效并不理想,因此研究VEGF的上游基因缺氧诱导因子-1(HIF-1)及其限速酶脯氨酸羟化酶(PHDs)在新生血管形成中的作用具有重要的临床意义. 目的 探讨外源性PHDs在HIF-1激活通路中的负性调节作用.方法用Hela细胞提取RNA,采用逆转录PCR法从cDNA克隆PHD1、PHD2和PHD3,通过限制性内切酶构建pFLAG-PHD1、pFLAG-PHD2和pFLAG-PHD3质粒并通过基因测序进行鉴定.分别将人RPE细胞株(ARPE-19)在体积分数21％ O2(常氧组)、1％ O2(低氧组)和缺氧模拟剂(CoCl2,缺氧组)条件下进行培养,将pFLAG-PHD1、pFLAG-PHD2和pFLAG-PHD3质粒分别转染至培养的ARPE-19细胞中,pFLAG-CMV2转染作为空白对照.采用Western blot法测定和比较转染细胞在不同氧环境培养下PHD1、PHD2和PHD3蛋白的表达强度;采用双荧光素酶报告系统评估各组细胞中HIF-1的转录活性. 结果 Western blot法检测显示常氧组、低氧组和缺氧组ARPE-19细胞中均有PHD1、PHD2和PHD3蛋白的表达,各组细胞中PHD2的表达条带均强于PHD1和PHD3蛋白,差异均有统计学意义(P＜0.05).pFLAG-CMX转染后常氧组细胞中内源性HIF-1活性反应低,低氧组和缺氧组细胞中HIF-1的转录活性明显升高,与空白对照组相比,pFLAG-PHD1、pFLAG-PHD2、pFLAG-PHD3转染后常氧组细胞中内源性HIF-1活性反应无明显变化(F=0.48,P＞0.05),而低氧及缺氧组细胞中HIF-1活性明显下降,与空白对照组比较差异均有统计学意义(F=24.30,112.67,均P＜0.05).相同培养条件下,pFLAG-PHD2转染后细胞中HIF-1活性明显低于pFLAG-PHD1和pFLAG-PHD3转染细胞,差异均有统计学意义(均P＜0.05). 结论 PHDs对人RPE细胞中HIF-1的激活通路有明显的负向调节作用,其对低氧细胞和缺氧细胞中HIF-1转录活性的抑制作用明显强于常氧细胞,其中PHD2抑制HIF调节通路的作用明显强于PHD1和PHD3.
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