期刊简介
中国科学技术协会主管，中华医学会主办。本刊原《眼科研究》，是中国科技论文统计源期刊和中文核心期刊。本刊关注国内外实验眼科学发展动态，传播眼科基础研究重大进展，报道眼科实验研究成果及其临床应用，读者对象为高等院校、科研单位和临床眼科工作者。本刊国内发行于包括港、澳、台在内的我国各省份和地区，国外发行在东南亚、北美、西欧等地区的部分国家。本刊期待刊出高质量的研究成果，以飨读者。
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首页>中华实验眼科杂志
- 杂志名称：中华实验眼科杂志
- 主管单位：中国科学技术协会
- 主办单位：中华医学会
- 国际刊号：2095-0160
- 国内刊号：11-5989/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：中国中文核心期刊期刊收录：北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 万方收录(中), 知网收录(中), 医学文摘, 哥白尼索引(波兰), 维普收录(中), 国家图书馆馆藏, JST 日本科学技术振兴机构数据库(日), CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), 上海图书馆馆藏, CA 化学文摘(美)
羟喜树碱对体外培养的人Tenon囊成纤维细胞自噬的诱导作用
徐心雨；童俊；范舒欣；袁志兰
关键词：自噬, 羟喜树碱, 人, Tenon囊, 成纤维细胞, 细胞培养, 青光眼
摘要：背景 滤过道瘢痕化及人Tenon囊成纤维细胞(HTFs)增生是抗青光眼滤过手术失败的主要原因.目前已有羟喜树碱诱导成纤维细胞凋亡及其机制的相关报道,但是羟喜树碱对HTFs自噬的影响鲜见报道. 目的 探讨羟喜树碱对体外培养的HTFs自噬的影响.方法 收集3例接受斜视手术患者的Tenon囊组织,以组织块培养法,用含体积分数10％胎牛血清(FBS)的DMEM培养基原代培养HTFs并传代,取第3～6代细胞进行培养.分别在培养基中加入0.0、0.5、1.0、4.0、10.0 mg/L羟喜树碱,继续培养HTFs 24 h,以细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测各组细胞的增生情况.选取4.0 mg/L羟喜树碱作用HTFs 24 h,用Cyto-ID自噬检测试剂盒进行荧光染色,观察各组细胞中自噬小体和自噬溶酶体成分的分布,用荧光显微镜和流式细胞仪分别对Cyto-ID染色阳性细胞数量及其荧光强度进行测定,并与对照组比较.用逆转录定量检测PCR(qRT-PCR)和Western blot法分别检测各组HTFs中自噬相关蛋白Beclin-1、自噬相关基因5(ATG-5)和微管相关蛋白1轻链3(LC-3)蛋白及其mRNA的相对表达水平.结果 随着羟喜树碱质量浓度的增加,HTFs细胞活力逐渐下降,0.0、0.5、1.0、4.0、10.0 mg/L羟喜树碱组HTFs细胞活力的总体差异有统计学意义(F=19.040,P＜0.001),1.0、4.0、10.0 mg/L羟喜树碱组HTFs的细胞活力均低于对照组,以10.0mg/L组低,差异均有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01,P＜0.01).qRT-PCR检测显示,4.0 mg/L羟喜树碱组HTFs中Beclin-1 mRNA、ATG-5mRNA和LC-3 mRNA的相对表达量分别是对照组的(3.225±0.346)、(2.839±0.418)和(3.761±0.224)倍,与对照组比较差异均有统计学意义(P=0.020、0.027、0.007).Western blot检测表明,4.0 mg/L羟喜树碱组HTFs中Beclin-1、ATG-5和LC-3蛋白表达的灰度值较对照组明显上升,LC-3Ⅱ/Ⅰ灰度值比值分别为0.965±0.159和0.275±0.860,差异均有统计学意义(P=0.003).Cyto-ID染色结果显示,4.0 mg/L羟喜树碱处理后,HTFs自噬阳性细胞的比例由未处理的(11.333±4.010)％上升到(55.000±9.013)％,差异有统计学意义(P=0.002).流式细胞仪检测表明,4.0 mg/L羟喜树碱处理后24 h Cyto-ID染色的平均荧光强度是对照组的(3.037±0.513)倍,差异有统计学意义(P=0.003).结论 羟喜树碱能诱导体外培养的HTFs发生自噬.
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