期刊简介
中国科学技术协会主管，中华医学会主办。本刊原《眼科研究》，是中国科技论文统计源期刊和中文核心期刊。本刊关注国内外实验眼科学发展动态，传播眼科基础研究重大进展，报道眼科实验研究成果及其临床应用，读者对象为高等院校、科研单位和临床眼科工作者。本刊国内发行于包括港、澳、台在内的我国各省份和地区，国外发行在东南亚、北美、西欧等地区的部分国家。本刊期待刊出高质量的研究成果，以飨读者。
往期目录
-
2000
-
2001
-
2002
-
2003
-
2004
-
2005
-
2006
-
2007
-
2008
-
2009
-
2010
-
2011
-
2012
-
2013
-
2014
-
2015
-
2016
-
2017
-
2018
-
2019
首页>中华实验眼科杂志
- 杂志名称：中华实验眼科杂志
- 主管单位：中国科学技术协会
- 主办单位：中华医学会
- 国际刊号：2095-0160
- 国内刊号：11-5989/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：中国中文核心期刊期刊收录：北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 万方收录(中), 知网收录(中), 医学文摘, 哥白尼索引(波兰), 维普收录(中), 国家图书馆馆藏, JST 日本科学技术振兴机构数据库(日), CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), 上海图书馆馆藏, CA 化学文摘(美)
人转化生长因子β诱导基因真核表达载体的构建及其对人角膜上皮细胞增生的影响
牛静宜；刘婧；李晓霞；陈建苏；徐锦堂；钟敬祥
关键词：转化生长因子β诱导基因, 角膜上皮细胞, 基质金属蛋白酶, 真核表达载体
摘要：背景 人转化生长因子-β诱导(TGFBI)基因是第一个被确定的角膜营养不良的致病基因,而TGFBI引起角膜营养不良的机制目前尚不清楚,研究TGFBI的功能对于揭示角膜营养不良的发病机制及了解角膜生理及病理功能都具有重要意义.目的 构建人TGFBI基因的真核表达载体并将其转染于人角膜上皮细胞,探讨其对角膜上皮细胞增生及相关基因表达的影响.方法 从角膜移植后剩余的供体角膜中提取人正常角膜组织总RNA,经逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)合成TGFBI cDNA,将TGFBI胶回收产物与载体pCMV-N-HA分别进行双酶切,取连接产物10 μl转化100μl大肠杆菌感受态DH5α克隆入真核表达载体pCMV-N-HA,以菌落PCR和EcoRV、XhoI双酶切法测序鉴定.设置重组质粒pCMV-N-HA-TGFBI转染组、空质粒pCMV-N-HA转染组、阴性对照组及pGFP-C2转染对照组,以测定重组质粒转染率.重组质粒pCMV-N-HA-TGFBI转染人角膜上皮细胞,激光共焦显微镜下观察转染pGFP-C2后增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的表达,用细胞计数试剂盒8(CCK-8法)检测转染细胞的增生情况,SYBR荧光实时定量PCR和Western blot法检测TGFBI、基质金属蛋白酶(MMPs)、组织金属蛋白酶抑制剂(TIMP)蛋白及其mRNA在转染后角膜上皮细胞的表达.结果 pCMV-N-HA-TGFBI阳性克隆质粒进行经EcoRV和XhoI双酶切鉴定测序结果显示,扩增的TGFBI cDNA以正确序列和方式插入载体,pGFP-C2载体转染人角膜上皮细胞后48 h共焦显微镜下可见EGFP的表达,转染效率为70％.重组质粒pCMV-N-HA-TGFBI转染组TGFBI mRNA的表达明显高于空质粒pCMV-N-HA转染组和阴性对照组,TGFBI蛋白仅在pCMV-N-HA-TGFBI转染组表达.CCK-8法显示重组质粒pCMV-N-HA-TGFBI转染组、空质粒pCMV-N-HA转染组和阴性对照组间角膜上皮的吸光度(A450)值的差异无统计学意义(F=3.34,P＞0.05).荧光实时定量PCR结果显示,重组质粒pCMV-N-HA-TGFBI转染组中MMP1mRNA、MMP3mRNA转录水平比空质粒pCMV-N-HA转染组和阴性对照组均升高(P＜0.05),而TIMP1mRNA则明显下降(P＜0.05)；Western blot结果证实MMP1、MMP3、TIMP1蛋白表达规律相同(P＜0.05).结论 人TGFBI基因真核表达载体可被成功构建并在人角膜上皮细胞中呈过表达.TGFBI可能是通过MMP1、MMP3及TIMP1的表达变化来增加细胞外基质的降解,从而参与角膜的某些生理病理过程.
友情链接